Tridentinska reformen genomfördes under Pius V:s tid. Han utgav den romerska katekesen, Catechismus Romanus (1566), en reviderad tidegärd, Breviarium Romanum (1568) och en mässbok, Missale Romanum (1570); alla var gällande ännu på 1960-talet. Mot protestanterna for han hårt fram genom inkvisitionen och fördrev många av judarna från Kyrkostaten.